結(jié)直腸癌是發(fā)達(dá)國家中最常見的腫瘤之一，盡管治療和診斷有所改善，但患者的死亡率仍然很高，這表明迫切需要新的生物標(biāo)記物來正確識(shí)別需要進(jìn)行特殊治療的高�；颊�。最近的研究表明，端粒蛋白TRF2在結(jié)直腸癌中過表達(dá)，并通過端粒外功能促進(jìn)腫瘤形成和發(fā)展，TRF2還會(huì)調(diào)節(jié)由VEGF-A介導(dǎo)的血管形成。
今天，小編給大家?guī)砹私Y(jié)直腸癌中單基因預(yù)后分析相關(guān)思路，這篇文章于2020年6月發(fā)表在《Journal of Experimental &Clinical Cancer Research》期刊上，影響因子7.068，題目為
TRF2 and VEGF-A: an unknown relationshipwith prognostic impact on survival ofcolorectal cancer patients。
癌癥樣本：
研究者收集了2000年1月至2013年12月在意大利羅馬ReginaElena國家癌癥研究所接受手術(shù)治療的185名未經(jīng)選擇的結(jié)直腸腺癌患者的腫瘤石蠟樣本。臨床數(shù)據(jù)：從醫(yī)院的醫(yī)療記錄中獲得，包括有關(guān)患者的性別和年齡、腫瘤分化、位置、大小、TNM階段、淋巴結(jié)(LN)轉(zhuǎn)移、組織病理學(xué)分級和治療的細(xì)節(jié)。TCGA數(shù)據(jù)集：
從cBioPortal中獲取了TCGA患者的基因組/轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)（結(jié)直腸腺癌，TCGA-泛癌數(shù)據(jù)）。剔除在疾病階段、VEGF-A/TRF2的表達(dá)和time-to-event等數(shù)據(jù)出現(xiàn)缺失的患者。在本研究中，作者分析了在ReginaElena國家癌癥研究所接受手術(shù)治療的185名結(jié)直腸癌患者的腫瘤樣本，所有病例的臨床和病理特征見表1（Table 1）.
Table 1
為了確定基因變異是否存在，作者對目前已知或者高度懷疑會(huì)促進(jìn)多種腫瘤進(jìn)展（包括CRC）的50個(gè)基因進(jìn)行了測序（NGS）（Fig.1a)。在185個(gè)分析病例中，18例由于技術(shù)原因無法分析，1例所有的研究基因均為野生型，18例存在單基因突變，剩余148例都存在多種基因突變（2-7個(gè)），這也表示不同的突變基因可以在一個(gè)樣本中共存（Fig.1b）。
數(shù)據(jù)分析表明，最常見的突變會(huì)出現(xiàn)在APC、TP53、KRAS、PI3KCa和KDR這五個(gè)基因中（Fig.1a），其中APC、TP53、KRAS和PI3KCa與CRC的腫瘤發(fā)生相關(guān)，而KDR編碼的VEGFR2，作為VEGF-A的主要受體，其突變狀態(tài)可能與VEGF-A在CRC患者中的預(yù)后作用相關(guān)。在對這五個(gè)基因的分析中，
166例患者中有156例發(fā)生突變，更準(zhǔn)確地說，40例出現(xiàn)了單個(gè)基因突變，116例表現(xiàn)出多個(gè)基因突變(55例有兩個(gè)突變、44例有三個(gè)突變、16例有四個(gè)突變和1例五個(gè)基因全部突變)（Fig.1c）。對于每一個(gè)選定的癌基因，根據(jù)其是否存在特定突變，將患者分類為野生型或突變型（Fig.1d），
APC突變率為49.7%，TP53突變率為43.1%，KRAS突變率為47.3%，PI3KCa突變率為33.5%，KDR突變率為36.5%。
TRF2和VEGF-A表達(dá)水平的免疫組化研究
185個(gè)CRC樣本的TMA切片使用抗TRF2和VEGF-A的抗體進(jìn)行標(biāo)記，并根據(jù)染色的強(qiáng)度進(jìn)行評分(Fig.2a，b)。當(dāng)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)核免疫反應(yīng)時(shí)，認(rèn)為結(jié)直腸腺癌
呈
TRF2
陽性。
IHC染色評分分為陰性（0），低（1+），中（2+），高（3+）。
對于VEGF-A，可以檢測到但出現(xiàn)微弱細(xì)胞質(zhì)免疫染色的腫瘤為1+，存在中等強(qiáng)度的完全細(xì)胞質(zhì)免疫染色的腫瘤為2+，表現(xiàn)出明顯而強(qiáng)烈的細(xì)胞質(zhì)免疫染色的腫瘤為3+。
在之后的分析中，評分0-1定義為低表達(dá)（L)，評分2-3定義為高表達(dá)（H）。
在185個(gè)樣本中，121個(gè)（65%）CRC樣本表示出TRF2高表達(dá)，而71個(gè)（39%）CRC樣本表現(xiàn)出VEGF-A
高表
達(dá)
（Fig.
2c）。在64例低TRF2水平的腫瘤中，52例（81%）為VEGF-A低表達(dá)，其余12例（19%）為VEGF-A高表達(dá)。相反，在121個(gè)TRF2高表達(dá)的樣本中，62個(gè)（51%）為VEGF-A低表達(dá)，59個(gè)（49%）為VEGF-A高表達(dá)。χ2-test證明這兩個(gè)特征之間存在顯著關(guān)聯(lián)（p<0.0001；Fig.2d)
TRF2和VEGF-A相關(guān)性的臨床分析
為了確定TRF2和VEGF-A的預(yù)后價(jià)值，
回顧
性評估了
平均隨訪時(shí)長
為66個(gè)月的
185例患者
（95%CI 61.8
-71.
15）的
進(jìn)展/無疾病生存率（P/DFS）
。
用Kaplan-Meier曲線分析時(shí)，
關(guān)于VEGF-A/TRF2的影響，作者注意到同時(shí)表達(dá)高水平VEGF-A和TRF2的患者具有較短的P/DFS(Fig.
3a)。
值得注意的是，
four-arms analysis
揭示了一個(gè)顯著的關(guān)聯(lián)（p=0.057），當(dāng)VEGF-A和TRF2高表達(dá)的患者與所有其他生物標(biāo)志物組合進(jìn)行比較時(shí)，具有非常顯著的意義（Fig.3b；p=0.003)。有趣的是，這些數(shù)據(jù)在TCGA的621名CRC患者中得到證實(shí)，其臨床結(jié)果包括PFS和DSS（Fig.3c，d)。
VEGF-A和TRF2均高表達(dá)的患者與VEGF-A低表達(dá)、TRF2高表達(dá)的患者相比，VEGF-A和TRF2均高表達(dá)的患者的生存率更低（Fig.4a）
。當(dāng)排除StageIV時(shí)，結(jié)果會(huì)更加有顯著，TRF2和VEGF-A本身對DFS沒有影響，它們在同時(shí)高表達(dá)的腫瘤中才會(huì)具有顯著的預(yù)后意義
（
F
ig.
4b
）
。接下來，作者評估了患者的P/DFS值(N=145)是否與給予的治療和結(jié)果有關(guān)。有趣的是，Kaplan-Meier曲線(
Fig.4c
，d)說明輔助性治療(主要是FOLFOX和5-FU，兩種未被報(bào)道影響端粒生物學(xué)或血管生成反應(yīng)的治療方法)對VEGF-A低表達(dá)且TRF2高表達(dá)的患者的預(yù)后產(chǎn)生了有益的影響，但對TRF2和VEGF-A均高表達(dá)的患者并無影響，這提示后一組患者可采用常規(guī)輔助治療和抗VEGF-A藥物聯(lián)合治療。
總之，本研究的結(jié)果確定TRF2和VEGF-A關(guān)聯(lián)為CRC中與預(yù)后相關(guān)的新生物標(biāo)志物。特別是TRF2和VEGF-A的共同表達(dá)與CRC患者的不良臨床結(jié)果相關(guān)，這些患者的疾病復(fù)發(fā)/進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)更大(主要為II和III階段)�？梢杂行Ю锰囟ǖ闹委煼桨�，包括基于血管生成抑制劑的藥理學(xué)方法進(jìn)行治療。
