a. 所有標(biāo)本應(yīng)及時(shí)固定（離體30分鐘內(nèi)固定最佳），使用新鮮的3.7％中性緩沖甲醛固定液，固定液的量應(yīng)為組織的10倍，固定時(shí)間8-48小時(shí)。

b. 標(biāo)本應(yīng)由內(nèi)鏡或手術(shù)醫(yī)師充分展開(kāi)，黏膜面向上，在標(biāo)本邊緣用大頭針固定于軟木板或泡沫板上釘板固定。應(yīng)每隔2-3mm垂直于黏膜面切開(kāi)全部取材。

c. “腺瘤伴浸潤(rùn)性癌”是指腺瘤含有穿透黏膜肌層浸潤(rùn)到黏膜下層的腺癌（pT1）�！跋倭霭楦呒�(jí)別上皮內(nèi)瘤變”包括了腺瘤伴重度異型增生、原位癌和黏膜內(nèi)癌。“高級(jí)別腺癌”、“腫瘤距離切緣小于1mm”、“脈管侵犯”和“高級(jí)別腫瘤出芽”為預(yù)后不良因素。

d. 根治術(shù)標(biāo)本，通常沿腫瘤對(duì)側(cè)剪開(kāi)腸管后固定，建議釘板固定。

e. 全直腸系膜切除術(shù)（total mesorectal excision, TME）的直腸癌標(biāo)本，系膜完整性評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)附表1。

f. “環(huán)周切緣”是指沒(méi)有腹膜覆蓋的腸壁“基底”切緣，建議手術(shù)醫(yī)師在環(huán)周切緣處涂色或加以標(biāo)識(shí)�！碍h(huán)周切緣陽(yáng)性”是指腫瘤距離切緣小于或等于1mm。 

g. 淋巴結(jié)按淋巴引流方向進(jìn)行取材并分組（腸旁、中間、中央），未經(jīng)新輔助治療的根治術(shù)標(biāo)本，檢出淋巴結(jié)總數(shù)原則上不少于12枚。若第一次未找到12枚淋巴結(jié)，建議復(fù)檢。

h. 結(jié)直腸癌組織學(xué)分型參考WHO消化系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)2019版，見(jiàn)附表2。

i. 組織學(xué)分級(jí)包括傳統(tǒng)的4級(jí)分法和WHO分類(lèi)的2級(jí)分法，基于腺體形成的程度，見(jiàn)附表3。

j. TNM病理分期（pTNM）采用AJCC/UICC第8版，pTNM前加前綴m、r和y分別代表多發(fā)性原發(fā)腫瘤、復(fù)發(fā)性腫瘤和治療后腫瘤的TNM病理分期。

k. 腫瘤退縮分級(jí)（TRG）的病理學(xué)評(píng)估依據(jù)殘留腫瘤成分以及纖維化程度進(jìn)行分析。推薦使用AJCC第8版TRG評(píng)分系統(tǒng)，見(jiàn)附表4。

l. 根據(jù)鑒別目標(biāo)選取，結(jié)直腸腺癌典型的免疫表型為CK7-/CK20+/CDX2+。

m. 錯(cuò)配修復(fù)（MMR）蛋白的檢測(cè)：免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)4個(gè)常見(jiàn)MMR蛋白（MLH1、MSH2、MSH6和PMS2）的表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核。任何1個(gè)蛋白表達(dá)缺失為dMMR（錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷），所有4個(gè)蛋白表達(dá)均陽(yáng)性為pMMR（錯(cuò)配修復(fù)功能完整）。

n. 微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）：建議采用美國(guó)國(guó)家癌癥研究院（NCI）推薦的5個(gè)微衛(wèi)星（MS）檢測(cè)位點(diǎn)（BAT25、BAT26、D5S346、D2S123和D17S250）。判斷標(biāo)準(zhǔn)為三級(jí)：所有5個(gè)位點(diǎn)均穩(wěn)定為MSS（微衛(wèi)星穩(wěn)定），1個(gè)位點(diǎn)不穩(wěn)定為MSI-L（微衛(wèi)星低度不穩(wěn)定），2個(gè)及2個(gè)以上位點(diǎn)不穩(wěn)定為MSI-H（微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定）。MSI多由MMR基因突變及功能缺失導(dǎo)致，也可以通過(guò)檢測(cè)MMR蛋白缺失來(lái)反映MSI狀態(tài)。一般而言，dMMR相當(dāng)于MSI-H， pMMR相當(dāng)于MSI-L或MSS。dMMR/MSI-H的結(jié)直腸癌治療具有特殊性。

o. RAS和BRAF基因突變檢測(cè)：檢測(cè)位點(diǎn)包括KRAS和NRAS基因的第2、3、4號(hào)外顯子及BRAF基因的V600E。結(jié)直腸癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶的RAS和BRAF基因狀態(tài)一致性較好，基于樣本的可獲取性，原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶均可進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶對(duì)治療反應(yīng)不一致時(shí)，建議對(duì)原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶都進(jìn)行檢測(cè)。除在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中具有療效預(yù)測(cè)作用以外，RAS和BRAF基因狀態(tài)對(duì)結(jié)直腸癌患者也具有預(yù)后指導(dǎo)意義。

p. 基因突變檢測(cè)可采用DNA直接測(cè)序法或ARMS法。通量更高、速度更快的高通量測(cè)序技術(shù)（high-throughput sequencing）或稱(chēng)二代測(cè)序技術(shù)（next-generation sequencing technology, NGS）也逐步運(yùn)用于臨床基因檢測(cè)。使用獲得認(rèn)證的NGS技術(shù)平臺(tái)和檢測(cè)產(chǎn)品，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，執(zhí)行規(guī)范的操作流程，才能確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。建議在檢測(cè)報(bào)告中明確基因狀態(tài)（如野生、突變或可疑）。使用NGS等定量檢測(cè)方法檢測(cè)RAS和BRAF基因突變時(shí)，建議以5％作為突變豐度的截?cái)嘀怠?/span>

q. 腫瘤出芽是指在浸潤(rùn)性癌的浸潤(rùn)側(cè)前沿，間質(zhì)內(nèi)散在的單個(gè)腫瘤細(xì)胞或≤4個(gè)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞簇。研究表明，腫瘤出芽是Ⅱ期結(jié)直腸癌預(yù)后相關(guān)指標(biāo)。在pT1結(jié)直腸癌（包括惡性息肉）中，高級(jí)別腫瘤出芽與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增高有關(guān)。2017年在Modern Pathology發(fā)表的“基于腫瘤出芽國(guó)際共識(shí)（ITBCC）2016 ”得到較為廣泛的認(rèn)同，可參照該共識(shí)對(duì)結(jié)直腸癌腫瘤出芽進(jìn)行分級(jí)和報(bào)告。腫瘤出芽分級(jí)為三級(jí)分法，具體方法為：在20倍目鏡（0.785mm）下選定一個(gè)熱點(diǎn)區(qū)域進(jìn)行瘤芽計(jì)數(shù)，0-4個(gè)為低級(jí)別，5-9個(gè)為中級(jí)別，≥10個(gè)為高級(jí)別。

r. 抗HER2治療和NTRK抑制劑的使用在結(jié)直腸癌治療中得到越來(lái)越多的重視。在有條件的情況下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)治療后失敗的結(jié)直腸癌患者可以進(jìn)行HER2狀態(tài)和NTRK基因融合的檢測(cè)。HER2狀態(tài)的檢測(cè)方法類(lèi)似于乳腺癌和胃癌，可以采用免疫組織化學(xué)和熒光原位雜交（FISH）的方法。目前結(jié)直腸癌HER2陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)僅來(lái)自于臨床研究，尚未建立經(jīng)過(guò)權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)證的伴隨診斷的判讀標(biāo)準(zhǔn)。在一項(xiàng)已發(fā)表的、結(jié)果為陽(yáng)性的臨床研究中，免疫組織化學(xué)檢測(cè)HER2陽(yáng)性定義為：大于50％的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)3+陽(yáng)性（即細(xì)胞膜的基底、側(cè)邊或側(cè)邊或整個(gè)胞膜呈強(qiáng)陽(yáng)性著色）；HER2評(píng)分為2+的患者應(yīng)通過(guò)FISH檢測(cè)進(jìn)一步明確HER2狀態(tài)，HER2基因擴(kuò)增的陽(yáng)性定義為大于50％的腫瘤細(xì)胞HER2/CEP17比值≥2.0。NTRK基因融合在結(jié)直腸癌中非常罕見(jiàn)，發(fā)生率約為0.35％，僅限于RAS和BRAF野生型的結(jié)直腸癌，且絕大多數(shù)為dMMR/ MSI-H的結(jié)直腸癌。檢測(cè)NTRK基因融合的方法有多種，免疫組織化學(xué)染色是一種快速、經(jīng)濟(jì)的初篩方法，但對(duì)NTRK基因融合仍需使用FISH或NGS方法進(jìn)行驗(yàn)證。使用獲得認(rèn)證的技術(shù)平臺(tái)和檢測(cè)產(chǎn)品，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，執(zhí)行規(guī)范的操作流程，才能確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。