本文介紹了《中華人民共和國藥典》2020 年版三部中病毒性制品相關(guān)的增修訂情況，主要內(nèi)容包括品種收載情況及新增品種概述、增修訂品種及通則情況以及共性增修訂內(nèi)容等。對增修訂的特點及原因進行分析，并提出了對下一步工作的建議，便于相關(guān)從業(yè)人員更好地理解和執(zhí)行《中華人民共和國藥典》2020 年版。

根據(jù)第十一屆國家藥典委員會全體會議通過的《中華人民共和國藥典》2020 年版編制大綱，經(jīng)各課題承擔(dān)單位起草、復(fù)核和疫苗制品專業(yè)委員會審核，完成了《中華人民共和國藥典》2020 年版三部病毒性疫苗的增修訂，目前《中華人民共和國藥典》2020 年版已正式出版，現(xiàn)將病毒性疫苗的主要增修訂情況介紹如下，為新版藥典的實施提供支持和參考。

一、 品種遴選及收載情況

按照國家藥品監(jiān)督管理局官方網(wǎng)站可查詢的信息，我國目前已上市的病毒性疫苗基本上已全部被收載入《中華人民共和國藥典》2015 版，未收載的已上市病毒性疫苗為數(shù)非常有限。依照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作程序和品種遴選原則，經(jīng)第十一屆藥典委員會疫苗專業(yè)委員會和醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會從藥學(xué)和醫(yī)學(xué)兩方面按照“安全有效、質(zhì)量可控”審議確定，將黃熱減毒活疫苗、凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 、Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗( Vero 細(xì)胞) 、口服Ⅰ型～Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 等 4 個品種作為《中華人民共和國藥典》2020 年版三部擬新增品種并立項開展標(biāo)準(zhǔn)研究，經(jīng)相關(guān)課題承擔(dān)單位的起草、復(fù)核和擴大驗證后，提交第十一屆藥典委員會相關(guān)專業(yè)委員會審議通過，經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)后正式收載于本版藥典。

二、新增品種概述

2．1 黃熱減毒活疫苗

該疫苗系采用黃熱病毒減毒株接種雞胚，經(jīng)培養(yǎng)、收獲組織、研磨、離心收獲病毒上清液、加入適宜穩(wěn)定劑凍干制成。用于預(yù)防黃熱病。該品種目前僅由 1 家企業(yè)生產(chǎn)，已上市多年，已被《中華人民共和國藥典》2015 年第一增本版收載，且在《歐洲藥典》( EP) 、《英國藥典》( BP) 、《美國藥典》( USP) 和《印度藥典》( IP) 均已收載。

相比于《中華人民共和國藥典》2015 年版第一增補本，《中華人民共和國藥典》2020 年版各論中做出 2 項修訂，即將“2．3．1 接種雞胚”的參數(shù)不再具體化，僅進行通用性描述; 同其他相關(guān)疫苗產(chǎn)品，為進一步明確“熱穩(wěn)定性試驗”系為生產(chǎn)企業(yè)對該產(chǎn)品上市后特定有效期內(nèi)的穩(wěn)定性預(yù)測而設(shè)定的、應(yīng)在出廠檢驗時進行的檢測項目，出廠后不再適合重復(fù)檢測，將“3．4．7 熱穩(wěn)定性試驗”由“成品出廠前應(yīng)進行熱穩(wěn)定性試驗”修訂為“由生產(chǎn)單位在成品入庫前取樣測定”。

2．2 凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 

該疫苗系采用狂犬病病毒固定毒種接種于人二倍體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、收獲、濃縮純化、滅活病毒后，加入適宜穩(wěn)定劑凍干制成，用于預(yù)防狂犬病。國內(nèi)首家凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 系采用 Pitman-Moore 株狂犬病固定毒作為毒種，接種 MＲC-5 細(xì)胞進行制備，于 2014 年獲批上市，目前國內(nèi)僅 1 家企業(yè)生產(chǎn)，多家企業(yè)處于研發(fā)或申報階段。

本品于2020 年首次收載入《中華人民共和國藥典》。《中華人民共和國藥典》2020 年版中本品相較于凍干人用狂犬病疫苗( Vero 細(xì)胞) ，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)除部分差異外，整體上基本一致。部分差異包括，凍干人用狂犬病疫苗( Vero 細(xì)胞) 明確了毒種傳代限定具體代次，并明確了毒種及病毒單次收獲液的病毒滴度要求以及原液蛋白含量要求，凍干人用狂犬病疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 僅規(guī)定應(yīng)符合批準(zhǔn)的要求，未明確具體傳代限定代次和病毒滴度限值。另外，不同于 Vero 細(xì)胞，人二倍體細(xì)胞屬于人源細(xì)胞，無需檢測宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量以及宿主細(xì)胞 DNA殘留量。

2．3 Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗( Vero 細(xì)胞)該疫苗系采用脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ～Ⅲ型減毒株分別接種于 Vero 細(xì)胞，經(jīng)病毒培養(yǎng)、收獲、濃縮、純化、滅活、按比例混合后制成。用于預(yù)防由脊髓灰質(zhì)炎Ⅰ～Ⅲ型病毒導(dǎo)致的脊髓灰質(zhì)炎。

該品種于 2015 年首次批準(zhǔn)上市，是我國自主研發(fā)一類新藥，具有良好的安全性和免疫原性，已納入國家計劃免疫程序。目前國內(nèi)有 2 家企業(yè)生產(chǎn)，為《中華人民共和國藥典》收載的第 1 個滅活的脊髓灰質(zhì)炎疫苗，接種途徑為肌內(nèi)注射，用于預(yù)防兒童脊髓灰質(zhì)炎病毒感染，避免了減毒活疫苗可能帶來的疫苗相關(guān)病例的缺陷，提高了疫苗接種的安全性 ［1］ 。

目前國外藥典收載采用脊髓灰質(zhì)炎病毒強毒株Salk 株制備的脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗，不包括 Sabin株制備的脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗。2014 年版 WHO 指導(dǎo)原則脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗收載了 Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗內(nèi)容［2］ 。

按照《中華人民共和國藥典》2015 年版三部生物制品通則［3］ 、人用疫苗總論的要求，根據(jù)已上市 2家品種的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，參考 WHO 脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗指導(dǎo)原則［2］ 及《中華人民共和國藥典》2015年版三部口服脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗各論，綜合已獲批上市產(chǎn)品的注冊標(biāo)準(zhǔn)，擬定了本品各論。目前國內(nèi)上市使用的 Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗研發(fā)按照 WHO 指導(dǎo)原則中脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗要求進行，除 Sabin 株特有質(zhì)量控制項目外，其他質(zhì)量控制項目和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與 WHO 指導(dǎo)原則中脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗基本一致。

相較于口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗，本品毒種檢定項目中對鑒別試驗、病毒滴定的培養(yǎng)溫度條件進行了修訂; 根據(jù) WHO 及國外相關(guān)指南，在分枝桿菌檢查增加了“也可采用經(jīng)過驗證的分枝桿菌核酸檢測替代培養(yǎng)法”，家兔檢查中增加了“經(jīng)原代猴腎細(xì)胞制備毒種應(yīng)作該項檢查”，免疫原性檢查中增加亞種子批，增加 Sabin 株基因鑒別試驗，刪除了 rct特征試驗。純化液中設(shè)置比活性測定，滅活驗證試驗按照 WHO 指導(dǎo)原則進行。半成品檢測細(xì)菌、真菌，并從體外效力( D 抗原含量測定) 和體內(nèi)效力( 大鼠效力試驗) 兩方面評估。成品檢測包括進行鑒別、理化、安全性和生物學(xué)活性等項目的全面評估。

2．4 口服Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 該疫苗系采用脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ和Ⅲ型減毒株分別接種于人二倍體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液制成的二價液體疫苗，用于預(yù)防Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎。本品于 2015 年首次批準(zhǔn)上市，目前國內(nèi)由 1家企業(yè)生產(chǎn)�！吨腥A人民共和國藥典》2015 年版收載的脊髓灰質(zhì)炎疫苗口服制劑包括脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗糖丸( 人二倍體細(xì)胞)、口服脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗( 猴腎細(xì)胞) 和脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗糖丸( 猴腎細(xì)胞) 。歐洲藥典、日本藥典、印度藥典和巴西藥典收載的均為含Ⅰ～Ⅲ型的脊髓灰質(zhì)炎病毒口服液體制劑。

基于 WHO 全球消滅脊髓灰質(zhì)炎的計劃，為消除由Ⅱ型疫苗株病毒引起的疫苗相關(guān)脊髓灰質(zhì)炎病例( VDPV) ，我國自 2016 年 5 月 1 日起實施新的脊髓灰質(zhì)炎疫苗免疫策略，停用三價脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗，用二價脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗替代三價，同時將脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗( IPV) 納入國家免疫規(guī)劃�？诜�Ⅰ和Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗( 人二倍體細(xì)胞，bOPV) 與脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗糖丸( 人二倍體細(xì)胞，tOPV) 使用相同的生產(chǎn)用Ⅰ型和Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎病毒株，且在半成品之前的生產(chǎn)工藝二者基本不變，質(zhì)量控制要求保持一致。對于成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其中外觀、裝量、抗生素殘留和 pH 值《歐洲藥典》未做規(guī)定。分型病毒滴度和熱穩(wěn)定性試驗擬定的國家標(biāo)準(zhǔn)與歐洲標(biāo)準(zhǔn)一致。其他常規(guī)項目均符合我國藥典的統(tǒng)一要求。具體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面，bOPV與 tOPV 種子批毒種、單一收獲液、單價原液檢定項目及標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置一致; 半成品檢定項目一致，但病毒滴度標(biāo)準(zhǔn)存在差異; 成品檢定項目方面，bOPV 與tOPV 在病毒滴度、外觀和裝量差異質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面存在差異，bOPV 較 tOPV 增加抗生素殘留檢定項和pH 值檢定項。

三、增修訂品種情況

2020 年版藥典對大部分《中華人民共和國藥典》2015 版已收載且載入 2020 年版藥典的預(yù)防類病毒性疫苗進行了修訂。品種修訂主要體現(xiàn)以下幾個方面［1］ : ① 對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和生產(chǎn)工藝控制描述進行了規(guī)范和簡化。② 進一步優(yōu)化了安全性檢測方法。③ 完善病毒減毒活疫苗毒種免疫原性檢查，結(jié)合藥品注冊管理要求逐步實現(xiàn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的接軌。④ 明確全基因序列測定在減毒活疫苗質(zhì)量控制中的應(yīng)用和要求。⑤ 結(jié)合國家對疫苗上市后不良反應(yīng)監(jiān)測的相關(guān)要求及國家免疫規(guī)劃的實施情況，取消疫苗使用說明內(nèi)容的收載。

對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和生產(chǎn)工藝控制描述進行了規(guī)范和簡化，主要包括對品種制造部分生產(chǎn)工藝步驟和參數(shù)等內(nèi)容進行修訂，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項目類別順序進行調(diào)整，對檢定項目進行修訂等。

修訂后的生產(chǎn)工藝內(nèi)容通用性和普適性增強，具體包括如細(xì)胞制備的溫度、，病毒接種量、培養(yǎng)溫度，病毒收獲時間，病毒滅活工藝參數(shù)，種子批限定代次，單次收獲液保存、原液保存等由《中華人民共和國藥典》2015 年版中具體參數(shù)描述修訂為通用性描述，如采用“適宜的”、“按批準(zhǔn)的執(zhí)行”等詞句進行描述。其中特殊情況為在重組乙型肝炎疫苗( 漢遜酵母) 各論中新增了1種規(guī)格。

對質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項目順序進行調(diào)整，主要為將單次病毒收獲液由制造項下轉(zhuǎn)移至檢定項下，體現(xiàn)對制品質(zhì)量控制要求的系統(tǒng)性。檢定項目修訂包括將熱穩(wěn)定性試驗明確為在成品出廠前測定; 基于國際上對鋁佐劑含量標(biāo)示的慣例，將氫氧化鋁含量測定修訂為鋁含量測定，標(biāo)準(zhǔn)限度以鋁含量作為標(biāo)示。此外，增加乙腦炎減毒活疫苗外觀項下的相關(guān)描述;將森林腦炎滅活疫苗各論中牛血清白蛋白殘留量由“ng·mL－1”修訂為“ng·劑－1”，DNA 殘留“pg·mL－1 ”修訂為“pg·－1”，與國內(nèi)外其他相關(guān)技術(shù)要求保持一致; 流感全病毒滅活疫苗和流感病毒裂解疫苗血凝素含量要求由“應(yīng)為配制量的 80% ～120%”修訂為“應(yīng)不低于標(biāo)示量 80%”; 流感病毒裂解疫苗卵清蛋白含量由“應(yīng)不高于 500 ng·mL－1”修訂為“應(yīng)不高于 200 ng·mL－1”。

進一步優(yōu)化了安全性檢測方法。例如，對凍干人用狂犬病疫苗( Vero 細(xì)胞) 品種的宿主細(xì)胞蛋白和 DNA 殘留量檢定方法優(yōu)化及標(biāo)準(zhǔn)化。2020 年版藥典采用新建立的 Vero 細(xì)胞蛋白質(zhì)國家標(biāo)準(zhǔn)品作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測 Vero 細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量，根據(jù)研究數(shù)據(jù)，將殘留限度由“＜4．0 μg·劑－1”修訂為“＜6．0 μg·劑－1”; 同時增訂 Vero 細(xì)胞 DNA 殘留量測定采用熒光定量 PCＲ( qPCＲ) 法( 通則 3407 第三法) ，該方法能準(zhǔn)確定量且采用客觀的結(jié)果判定方式并可區(qū)分片段大小。由于方法驗證時尚未完全排除成品對檢測方法的干擾，因此，2020 年版藥典將該項檢測納入原液檢定項進行檢測，對應(yīng)限度標(biāo)準(zhǔn)由“應(yīng)不高于100 pg·劑－1”調(diào)整為“應(yīng)不高于 3 ng·劑－1”。

完善病毒減毒活疫苗毒種免疫原性檢查，將凍干甲型肝炎減毒活疫苗、麻疹減毒活疫苗、腮腺炎減毒活疫苗、風(fēng)疹減毒活疫苗( 人二倍體細(xì)胞) 等已收載減毒活疫苗各論毒種檢定項下的免疫原性檢查要求修訂為“建立或變更主種子批時應(yīng)確認(rèn)主種子批的免疫原性，必要時應(yīng)根據(jù)藥品注冊管理的相關(guān)要求開展相應(yīng)的臨床試驗”。

依據(jù)生物制品通則《生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理及質(zhì)量控制》相關(guān)要求，明確減毒活疫苗各論全基因序列測定的應(yīng)用和要求。

四、增修訂通則情況

新增黃熱減毒活疫苗猴體試驗檢查法通則( “3307 黃熱減毒活疫苗猴體試驗”)。

疫苗效力測定方面，新增通則“3534 Sabin 株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗效力試驗”。人用狂犬病疫苗效價測定在傳統(tǒng)經(jīng)典的 NIH 效力試驗方法基礎(chǔ)上，新增通則“3503 人用狂犬病疫苗效價測定法中第二法改良 NIH 法”，以備在特定情況下的疫苗檢定使用。改良 NIH 法是在 NIH 法基礎(chǔ)上采用參考疫苗和供試品單點稀釋和結(jié)果判定的方法，可減少實驗動物用量、降低實驗人員的工作量和操作時間等。WHO對于單一稀釋法用于人用狂犬病疫苗的推薦意見是疫苗上市后，至少經(jīng)過 2 年的連續(xù)考察及確認(rèn)，當(dāng)疫苗批間一致性良好、質(zhì)量可控時，經(jīng)國家監(jiān)管當(dāng)局批準(zhǔn)，改良 NIH 法可用于上述企業(yè)生產(chǎn)的疫苗批簽發(fā)的效價測定。當(dāng)某批疫苗采用單一稀釋法測定疫苗效價不符合規(guī)定時，應(yīng)采用經(jīng)典的 NIH 法進行復(fù)試和結(jié)果判定。

五、共性增修訂內(nèi)容

5．1 疫苗總論修訂 ［4］

參考《歐洲藥典》9．0 版 ［5］修訂聯(lián)合疫苗定義，修訂輔料人血白蛋白來源要求，增訂內(nèi)包材的質(zhì)控要求，半成品配制增加對多批原液合并的要求，半成品檢測項目僅保留無菌檢查和含鋁佐劑相關(guān)項目檢查。工藝雜質(zhì)殘留檢測方面考慮 ICH ［6］ 對工藝雜質(zhì)按照與疫苗關(guān)鍵質(zhì)量屬性相關(guān)的工藝雜質(zhì)和一般工藝雜質(zhì) 2 類分別要求。新增對聯(lián)合疫苗、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的要求。參考 ICH 5C ［7］ 更加明確穩(wěn)定性評價的表述，便于實際操作�；�于 2020年版藥典疫苗各論不再收載使用說明，因此，在總論中進一步明確說明書應(yīng)符合國家相關(guān)規(guī)定等原則性要求。

2020 年版藥典“人用疫苗總論”對于原液制備的關(guān)鍵修訂內(nèi)容是增訂關(guān)于制備工藝參數(shù)設(shè)定的原則，即“原液制備的工藝步驟和參數(shù)的設(shè)定應(yīng)基于工藝效能，純化工藝的選擇應(yīng)兼顧抗原純度、活性、殘留物限度等因素，以獲得最適的收獲物和最少的工藝雜質(zhì)為目標(biāo)，工藝應(yīng)經(jīng)驗證”。此外，半成品配制方面，明確了關(guān)于原液合批配制的相關(guān)原則，即“疫苗制品的生產(chǎn)設(shè)計應(yīng)使相關(guān)設(shè)備的能力與生產(chǎn)規(guī)模相匹配，為保證上市產(chǎn)品的溯源和追蹤，半成品配制原則上應(yīng)來源于一批原液，不同批原液合批配制半成品的，應(yīng)評估可能存在的風(fēng)險并經(jīng)批準(zhǔn)”。

5．2 生物制品通則新增《生物制品通用名稱命名原則》 

為規(guī)范生物制品通用名稱的使用，保證臨床使用和流通過程中對生物制品的準(zhǔn)確識別，以及對上市藥品全生命周期追溯和藥物警戒監(jiān)管，根據(jù)我國生物制品實際情況，參照國際通用原則制定了“生物制品通用名稱命名原則”，該原則對疫苗通用名稱進行了進一步規(guī)范和細(xì)化，疫苗屬于命名原則中尚無 WHO 國際通用名稱( INN) 分類的生物制品。

5．3 通則增修訂

修訂通則“3604 新生牛血清”。隨著國內(nèi)對人用生物制品生產(chǎn)用動物來源的生物材料安全性、有效性等問題越來越重視，疫苗生產(chǎn)企業(yè)對牛血清產(chǎn)品的質(zhì)量要求越來越高，牛血清的質(zhì)量控制工作也需進一步加強和提高。研制了用于新生牛血清血紅蛋白含量測定用的國家標(biāo)準(zhǔn)品。對于支持細(xì)胞增殖檢查，《美國藥典》在細(xì)胞的種類和評價方法上均有更細(xì)化更全面的要求，而我國藥典僅有在半貼壁細(xì)胞上的檢測要求。2020 年版藥典對“血紅蛋白”和“支持細(xì)胞增殖檢查”2 個項目進行了標(biāo)準(zhǔn)修訂，力求進一步提高新生牛血清的質(zhì)量控制工作，加強與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌。

5．4 其他增修訂

其他新增的相關(guān)生物制品通則、通則及指導(dǎo)原則包括: 生物制品病毒安全性控制、3308 禽源性病毒熒光定量 PCＲ 檢查法、3407 外源性 DNA 殘留量測定法( 第三法) 、生物制品穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則等。

六、 小結(jié)

2020 年版藥典在 2015 年版藥典的基礎(chǔ)上新增收載預(yù)防用病毒性疫苗品種數(shù)量進一步增加，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)緊跟科技發(fā)展前沿，不斷提高且更加完善，與國際標(biāo)準(zhǔn)更加協(xié)調(diào)，更具合理性和可操作性。

2020 年版藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)整體上與同類品種國際相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)基本一致，但是基于我國國情，《中華人民共和國藥典》較國際標(biāo)準(zhǔn)更加注重制品的最終放行檢驗，部分品種成品檢測項目明顯更多，在涉及與安全性相關(guān)的雜質(zhì)控制限度要求高于 WHO 標(biāo)準(zhǔn)和《歐洲藥典》等，且 2020 年版藥典對雜質(zhì)等檢測項目納入了新技術(shù)方法，可更好控制產(chǎn)品的安全性［9］ 。新增且完善了生物制品通用技術(shù)要求，全面覆蓋已上市生物制品質(zhì)量控制的各個環(huán)節(jié)。如參照國際通用名稱命名原則，制定了生物制品通用名稱命名原則［8］ ，其中明確了疫苗品種的命名原則，由此可規(guī)范生物制品通用名稱的使用，保證臨床使用和流通過程中對生物制品的準(zhǔn)確識別，以及對上市藥品全生命周期追溯和藥物警戒監(jiān)管。對各論體例、描述以及質(zhì)量指標(biāo)進行修訂，與國際標(biāo)準(zhǔn)更加協(xié)調(diào)統(tǒng)一，且適用范圍更廣，對在研同類品種具有很好的引導(dǎo)作用。

與此同時，還應(yīng)看到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚有進一步提高的空間，如目前減毒活疫苗滴度檢測存在方法學(xué)差異，可考慮研究變更病毒滴度測定方法，以達到同國外檢測方法接軌的目的�？煽紤]將全基因序列測定納入病毒性疫苗各論項下毒種主種子批檢定項目要求中。此外，疫苗效價測定法置信區(qū)間的完善也需進一步開展相關(guān)研究。